病理学第二講座

《研究概要》
Ｉ．天然産物による乳癌抑制の試み
　大豆に含まれるGenisteinや魚油に存在するn-3系多価不飽和脂肪酸であるエイコサペンタエン酸（EPA）は乳癌に対して増殖抑制作用を有し、これら両者の併用により相乗的に作用することを証明した（J Cancer Res Clin Oncol 126: 448-454, 2000）。日本人は大豆を常食とし、魚を好むが、このデータは日本風食習慣の再評価による癌予防に示唆をあたえること大と考える。我々はさらに、疫学の示す癌抑制機能を有する食品因子の乳癌抑制機能につき実験室レベルで検討した。フランス人は高脂肪食の食習慣にもかかわらず、心血管病変の発生率が低いことを“French paradox”というが、この要因として赤ワインに豊富に含まれるResveratrolとの関連が注目されている。Resveratrolには各種ヒト培養腫瘍細胞株に対する細胞増殖抑制効果があることが報告されていることより、ヒト乳癌培養細胞株に対する細胞増殖抑制効果、ならびに乳癌増殖作用をもつリノール酸に対する拮抗作用につき検討した（原著1）。ResveratrolはMCF-7、KPL-1、MKL-Fの3株とも時間依存性、濃度依存性に細胞増殖抑制効果がみられた。また、Resveratrol添加により、Bax、Bakの増加、Bcl-XLの減少、Caspase-3活性の上昇をみた。さらに、Resveratrolはリノール酸の細胞増殖活性に拮抗した。Resveratrolはアポトーシスを介する細胞増殖抑制効果を示し、西欧風高脂肪食（高リノール酸食）による乳癌増殖促進作用に拮抗する。さらに、疫学的に機能性食品として癌予防効果が最も期待されるニンニクに含まれる脂溶性イオウ化合物であるdiallyl disulfide（DADS）の乳癌抑制効果につきヒト乳癌細胞株（KPL-1、MCF-7、MDA-MB-231、MKL-F）を用いて検討した（原著6）。MTTアッセイによると、いずれの細胞株も増殖抑制をみた。MDA-MB-231株にDADSを添加し、フローサイトメトリーで解析したところ、SubG1分画の出現を認めた。KPL-1細胞株をヌードマウス右胸部乳腺に正所性移植し、1mgあるいは2mgDADSを週3回腹腔内投与し、移植腫瘍の増殖を無処置群と比較すると、DADS処置群では腫瘍増殖の遅延がみられ、移植後35日目では各の腫瘍重量は無処置群の57％にとどまった。また、DADSはリノール酸の乳癌増殖効果に拮抗し、EPAとの併用で相乗効果を発揮した。DADSはヒト乳癌細胞株の増殖を抑制するとともに、西欧風高脂肪食（高リノール酸食）による乳癌増殖促進作用に拮抗し、日本食（高EPA食）による乳癌抑制効果を増強する。食品因子には癌抑制効果を発揮する種々の天然物質が含まれる。これらは単独にあるいは複合的に作用し、アポトーシスを介して増殖抑制能を発揮する。癌予防の観点からもこれら天然産物の同定は重要と考える。

Ⅱ．実験的副腎卒中の機序解析
　多環芳香族炭化水素である7, 12-dimethylbenz (a) anthracene（DMBA）はラットに乳癌や白血病を誘発する発癌剤である。DMBAによるラット副腎卒中は1961年に元本講座主任、森井外吉名誉教授がChicago大学Ben May癌研究所のC.B. Huggins教授のもとで乳癌の研究中に偶然に見い出した現象である。30mg DMBAを2mlのゴマ油に溶解し単回胃内投与するか、6mg DMBA含有1.2mlの脂肪乳剤を単回静注すると高率に副腎出血が招来し、皮質細胞死を惹起し、ある個体は石灰化巣を残して皮質細胞の再生をみる。副腎障害は束状層と網状層に限局し、球状層や髄質は障害をまぬがれる。しかし、今日まで束状／網状層の細胞死がいかなる機転によるものか確定していない。我々は常法に則り副腎卒中を惹起せしめ、この機構解明にとりくんだ（原著5）。DMBA投与12時間で障害細胞はTUNEL陽性となり、36時間でTUNEL指数は極値を呈する。経過中、皮質細胞は形態的にも特有のクロマチンの核縁への凝集がおこり、細胞死はapoptosisといえる。さらに、この時期、アポトーシスに促進的に働くBax蛋白の発現亢進やカスパーゼ3の活性増強、アポトーシスに抑制的に働くBcl-2蛋白の発現抑制をみた。しかし、大量出血の発生とともに局所に虚血が誘発され凝固壊死（post-apoptotic necrosis）の発生をみた。なお、72時間から5-bromo-2’-deoxyuridine（BrdU）陽性細胞が球状層の下層（移行帯）に出現し、経時的に髄質に向けて陽性細胞数を増し、これら細胞はp450 11β陽性を呈することから、移行帯に存在する細胞が副腎皮質の再生に関与する幹細胞と考えられた。なお、2週においては一部の副腎に馬蹄型を呈する石灰化巣を残して修復は完了した。よって、DMBAによる副腎卒中とはapoptosisによる束状／網状層細胞の選択的障害であり、皮質細胞の再生は移行帯に存在する幹細胞によると結論できた。

《研究業績》

原　　著

Nakagawa H, Kiyozuka Y, Uemura Y, Senzaki H, Shikata N, Hioki K and Tsubura A (2001)
Resveratrol inhibits human breast cancer cell growth and may mitigate the effect of linoleic acid, a potent breast cancer cell stimulator.
J Cancer Res Clin Oncol 127: 258-264

Kiyozuka Y, Tsuta K, Akamatsu T, Matsuyama T, Mizuta H, Nakanishi K, Nakano S and Tsubura A (2001)
Cytologic features of primary mixoid malignant fibrous histiocytoma arizing in the uterus.
Acta Cytol 45: 1060-1068

Kiyozuka Y, Nakagawa H, Uemura Y, Senzaki H, Yamamoto A, Noguchi T, Mizuta H, Nakanishi K, Nakano S and Tsubura A (2001)
Novel cell lines established from a human myxoid malignant fibrous histiocytoma arizing in the uterus.
Cancer Genet Cytogen 127: 7-15

Shimizu M, Fontana A, Takeda Y, Yoshimoto T, Tsubura A and Matsuzawa A (2001)
Fas/Apo1 (CD95)-mediated apoptosis of neutrophils with Fas ligand (CD95L)-expressing tumors is crucial for induction of inflammation by neutrophilic polymorphonuclear leukocytes associated with antitumor immunity.
Cell Immunol 207: 41-48

Tsuta K, Shikata N, Kominami S and Tsubura A (2001)
Mechanisms of adrenal damage induced by 7, 12-dimethylbenz (a) anthracene in female Sprague-Dawley rats.
Exp Mol Pathol 70: 162-172

Nakagawa H, Tsuta K, Kiuchi K, Senzaki H, Tanaka K, Hioki K and Tsubura A (2001)
Growth inhibitory effects of diallyl disulfide on human breast cancer cell lines.
Carcinogenesis 22: 891-897

Yasuda T, Yoshimoto T, Tsubura A and Matsuzawa A (2001)
Clear suppression of Th1 responses but marginal amelioration of autoimmune manifestations by IL-1 2p40 transgene in MRL-Fas ^lprcg / Fas ^lprcg mice.
Cell Immunol 210: 77-86

Kiyozuka Y, Mizuta H, Nakanishi K, Nakano S and Tsubura A (2001)
Malignant fibrous histiocytoma of the uterus : a case with immunohistochemical, ultrastructural and tumor cell culture studies.
In Vivo 15: 227-231

Kiyozuka Y, Nakagawa H, Senzaki H, Uemura Y, Adachi S, Teramoto Y, Matsuyama T, Bessho K and Tsubura A (2001)
Bone morphogenetic protein-2 and type IV collagen expression in psammoma body forming ovarian cancer.
Anticancer Res 21: 1723-1730

Yokoi H, Nakata M, Sawai K, Yoshida T, Koshikawa M, Joyama S, Tanaka A, Goto M, Ueda S, Senzaki H, Sugawara A and Kuwahara T (2001)
Intraglomerular metastasis from pancreatic cancer.
Am J Kidney Dis 37: 1299-1303

中川宏之，清塚康彦，植村芳子，仙崎英人，四方伸明，田中完児，日置紘士郎，螺良愛郎（2001）
Resveratrolによるヒト乳癌培養細胞株に対する増殖抑制効果．
乳癌基礎研　10: 62-65

楊　継紅，義澤克彦，中川宏之，四方伸明，螺良愛郎（2001）
周生期genistein暴露によるICRマウス乳腺病変への影響．
乳癌基礎研　10: 7-11

四方伸明，義澤克彦，木内克治，楊　継紅，螺良愛郎（2001）
MNU誘発新生仔期脱毛症モデルを用いたCepharanthinの脱毛遅延効果．
アルカロイド研究会誌　27: 95-102

仙崎英人，上田　惠，植村芳子，中川宏之，蔦　幸治，螺良愛郎（2001）
大腸癌を有したCronkhite-Canada症候群の1例．
癌の臨　47: 161-166

山本大悟，田中完児，岩本慈能，高田秀穂，権藤秀樹，仙崎英人，螺良愛郎（2001）
多価不飽和脂肪酸による腫瘍増殖の関与．
JJPEN　23: 335-341

是枝　敬，畑埜武彦，中川宏之，日置紘士郎，螺良愛郎（2001）
小葉形成を伴う女性化乳房症の一症例．
乳癌の臨　16: 519-522

足立　靖，小柳津竜樹，仙崎英人，堀井嗣夫，荻野廣太郎，中村彰利，村上貴孝，小柳津治樹，池袋一哉，池原　進，螺良愛郎（2001）
インフルエンザ菌によるWaterhouse-Friderichsen症候群の1剖検例．
小児臨　54: 2039-2042

総　　説

Senzaki H, Tsubura A and Takada H (2001)
Effect of eicosapentaenoic acid on the suppression of growth and metastasis of human breast cancer cells in vivo and in vitro.
World Rev Nutr Diet 88: 117-125

螺良愛郎，四方伸明，仙崎英人，植村芳子（2001）
乳腺脂質分泌癌．
病理と臨　19: 496-499

学会発表

Nambu H, Yamada H, Kikuchi K, Matsumura M, Yoshizawa K and Tsubura A (2001)
Light inhibition reduces MNU-induced photoreceptor apoptosis.
ARVO, Fort Lauderdale, Florida

Kiyozuka Y, Nakagawa H, Tsuta K, Kiuchi K, Senzaki H and Tsubura A (2001)
X-ray microimaging of mitochondrial distribution of cisplatin: Cisplatin-induced mitochondrial dysfunction and apoptosis in ovarian cancer cells.
The 12th International Meeting on Gynaecological Oncology, Venice, Italy

四方伸明，義澤克彦，中川宏之，蔦　幸治，螺良愛郎（2001）
周生期genistein暴露によるICRマウス乳腺病変への影響．
第90回日本病理学会，東京

仙崎英人，四方伸明，植村芳子，清塚康彦，上田　惠，螺良愛郎（2001）
悪性末梢神経鞘腫を多発した神経線維腫症1型の一例．
第90回日本病理学会，東京

清塚康彦，中川宏之，蔦　幸治，木内克治，仙崎英人，螺良愛郎（2001）
Myxoid MFHにおける細胞接着分子の発現およびホルモン応答能について．
第90回日本病理学会，東京

中川宏之，木内克治，蔦　幸治，清塚康彦，仙崎英人，田中完児，四方伸明，日置紘士郎，螺良愛郎（2001）
ヒト乳癌培養細胞株に対するdiallyl disulfideの増殖抑制効果．
第90回日本病理学会，東京

蔦　幸治，螺良愛郎，斉木茂樹（2001）
血球貪食症候群を伴ったLangerhans cell histiocytosisの一例．
第90回日本病理学会，東京

木内克治，義澤克彦，蔦　幸治，中川宏之，螺良愛郎（2001）
MNU誘発マウス網膜変性症に対するニコチンアミドの影響．
第90回日本病理学会，東京

新宅雅幸，蔦　幸治，南　求，吉田秀彦，螺良愛郎（2001）
眼瞼から涙丘部にかけて発生したアポクリン化生癌の1例．
第90回日本病理学会，東京

畑埜武彦，是枝　敬，二階堂泰資，植村芳子，仙崎英人，清塚康彦，日置紘士郎，螺良愛郎（2001）
乳腺粘液癌7例の検討─神経内分泌への分化との関連─．
第9回日本乳癌学会総会，前橋

中川宏之，田中完児，富永祐司，山本大悟，螺良愛郎，日置紘士郎（2001）
EPAとGenisteinによるヒト乳癌細胞増殖抑制における相乗効果．
第9回日本乳癌学会総会，前橋

義澤克彦，木内克治，南部裕之，仙崎英人，清塚康彦，四方伸明，螺良愛郎（2001）
Caspase-3阻害剤によるrdマウス網膜変性症の抑制効果．
第60回日本癌学会，横浜

清塚康彦（2001）
卵巣明細胞腺癌のglycogen代謝からみた抗癌剤耐性機構．
第19回ヒト細胞学会，東京

馬殿徹也，山道啓吾，仙崎英人，浅井　晃，道浦　拓，中井宏治，中根恭司，螺良愛郎，日置紘士郎（2001）
N-nitorosomethylbenzylamineラット食道癌発癌モデルにおける発癌過程の検討．
第56回日本消化器外科学会，秋田

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